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ATP含量测定试剂盒是利用肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应ATP含量。
ATP广泛存在于动物、植物、微生物中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。

组份	50T
组份A：干粉试剂A	1瓶
组份B：液体试剂B	3mL
组份C：干粉试剂C	1瓶
组份D：液体试剂D	10mL
组份E：液体试剂E	50mL
组份F：标准品F	10mL
组份G：提取液G	60mL
组份H：提取液H	60mL
组份I：提取液I	25mL
组份J：提取液J	25mL

2～8℃避光保存。有效期6个月。


分光光度计，离心机，水浴锅，天平，移液器，1mL玻璃比色皿，研钵，蒸馏水，乙醚


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 最低检测限为10nmol/mL或10nmol/g鲜重或0.1nmol/mg prot。


一、样本处理
1.将100mg酵母细胞沉淀用500μL试剂I重悬，室温静置15分钟。
2.1000×g离心10分钟，弃上清，留沉淀。
3.用PBS洗涤沉淀一次。
4.用500μL试剂J重悬沉淀，在37℃轻微振荡1～4小时。
5.1000×g离心10分钟，弃上清，留沉淀。
6.按照酵母质量（g）：提取液G体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g酵母，加入1mL提取液G），进行冰浴匀浆，8000×g 4℃离心10min，取上清至另一EP管中，加入等体积的提取液H，充分混匀，8000×g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、试剂配制
显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.87mL），按试剂D(mL)：
试剂E（mL）=1：5的比例配制。用多少配多少。
试剂A粉剂×1支，4℃保存；临用前加入2mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂C粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入300μL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
三、样本测定
1.打开分光光度计，预热，调节检测波长至700nm，蒸馏水调零；
2.按下表添加试剂：

试剂名称(μL)	测定管	对照管	标准管	空白管
样本	30	30
标准液F			30	30
试剂A	60		60
试剂B	30	30	30	30
试剂C	10		10
纯水		70		70
充分混匀，37℃准确水浴30min
显色剂	870	870	870	870

3.在37℃水浴20min后，700nm下测定各管吸光值
注：
● 空白管、标准管只需做一管。
● 每个测定管均需要设一个对照管。
四、ATP含量计算公式
1.按样本重量计算
ATP含量（μmol/g鲜重)=[C标准管×(A测定管－ A对照管)÷(A标准管－ A空白管)×V1]÷(W×V1÷V2)
=2×(A测定管－A对照管)÷(A标准管－A空白管)÷W
2.按照蛋白浓度计算
ATP含量(μmol/mg prot)=[C标准管×(A测定管－A对照管)÷(A标准管－A空白管)×V1]÷(V1÷Cpr）
=1×(A测定管－A对照管)÷(A标准管－A空白管)÷Cpr
注：
● 蛋白质含量需要另外测定。
注：
C标准管：标准液浓度，1μmol/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V2：加入提取液体积，2mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
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